Übungsaufgaben
1. Nenne Unterschiede zwischen bakterieller chromosomaler DNA und bakterieller Plasmid-DNA!
Lösung
X
Lösung
Die chromosomale DNA ist sehr lang und trägt alle Gene, welche das Bakterium zur Reproduktion braucht. Sie kommt in nur einer Kopie pro Zelle vor (Ausnahmen während der Zellteilung). Plasmid-DNA ist viel kleiner als chromosoale DNA, trägt nur eine kleine Anzahl von Genen und kann in vielen Kopien pro Zelle vorkommen.
2. Was bewirkt NaOH bei einer Plasmid-Isolation?
Lösung
X
Lösung
NaOH bewirkt eine pH-Verschiebung, so dass sich die Wasserstoffbrücken einer nicht überspiralisierten DNA lösen.
3. Welche Eigenschaften sollte ein Plasmid haben, damit es sich für die DNA-Klonierung eignet?
Lösung
X
Lösung
Das Plasmid sollte eine nur einmal vorkommende Restriktionsenzym-Schnittstelle, einen "origin of replication" und einen Selektionsmarker tragen.
4. Was sind Restriktionsenzyme? Woher stammen sie und welches ist ihre biologische Funktion?
Lösung
X
Lösung
Restriktionsenzyme sind DNasen, welche doppelsträngige DNA sequenz-spezifisch schneiden. Sie stammen aus Mikroorganismen und erlauben es diesen, fremde DNA zu inaktivieren.
5. Was ist der Vorteil von kohäsiven DNA-Enden bei der Ligation von DNA?
Lösung
X
Lösung
Kohäsive Enden können leicht ligiert werden, weil sie Basenpaarung eingehen können. Voraussetzung ist, dass die beiden DNA-Stücke mit dem gleichen Restriktionsenzym geschnitten wurden.
6. Was ist ein "Linker"?
Lösung
X
Lösung
Linker sind kleine DNA-Stücke mit bekannter Sequenz. Sie lagern sich mit ihren glatten Enden an die glatten Enden der DNA und können dann ligiert und mit Restriktionsenzymen geschnitten werden.
7. Was versteht man im Zusammenhang mit DNA-Klonierung unter einem "Vektor"?
Lösung
X
Lösung
Ein Vektor ist ein Vehikel für den DNA-Transport in eine Zelle.
8. Wie integriert man ein DNA-Fragment in einen Vektor?
Lösung
X
Lösung
Man kreiert ligierbare Enden am Vektor und am DNA-Fragment (stumpf oder kohäsiv; wenn kohäsiv, dann mit dem gleichen Restriktionsenzym für beide DNA's) und ligiert sie enzymatisch.
9. Was versteht man im Zusammenhang mit DNA-Klonierung unter "Transformation"?
Lösung
X
Lösung
Unter Transformation versteht man das Einschleusen von DNA in Zellen.
10. Was versteht man unter einem "Klon"?
Lösung
X
Lösung
Ein Klon ist eine Gruppe oder Kolonie von genetisch identischen Individuen.
11. Wie trennt man eine mRNA von der restlichen RNA einer Zelle?
Lösung
X
LösungMan trennt eine mRNA mittels Hybridisierung des Poly (A)-Schwanzes an Oligo(dT)-Säulen von der restlichen RNA der Zelle ab.
12. Was ist eine "cDNA"?
Lösung
X
Lösung
Eine cDNA ist eine doppelsträngige DNA, welche durch enzymatisches Kopieren einer mRNA gewonnen wurde?
13. Welche Bedingungen muss eine cDNA-Bank erfüllen, aus welcher Sie den offenen Leserasters eines Gens isolieren wollen?
Lösung
X
Lösung
Die cDNA-Bank muss von mRNA aus Zellen stammen, welche den offenen Leseraster (das Gen) exprimieren, und sie muss so gross sein (Anzahl Klone), dass der offene Leseraster mit hoher Wahrscheinlichkeit enthalten ist.
14. Was versteht man unter einer "genomischen Bank"?
Lösung
X
Lösung
Restriktionsenzyme sind DNasen, welche doppelsträngige DNA sequenz-spezifisch schneiden. Sie stammen aus Mikroorganismen und erlauben es diesen, fremde DNA zu inaktivieren.
15. Wieso können sich Viren nur in lebenden Zellen vermehren?
Lösung
X
Lösung
Viren sind für ihre Vermehrung auf den Proteinsynthese-Apparat einer Zelle angewiesen.
16. Welche Voraussetzungen müssen erfüllt sein für die Isolation eines Klons mittels Immunscreening?
Lösung
X
Lösung
Das Gen muss von der transformierten Zelle exprimiert werden, und wir müssen einen Antikörper gegen das Protein haben.